Получение рекомбинантных белков в клетках Escherichia coli с помощью генной инженерии
Биотехнология является одной из быстро развивающихся областей биологии. С помощью биологических систем исследователи пытаются получать все новые и новые вещества, в том числе белки для решения разнообразных задач. Любопытно, что кишечная палочка (E.coli) до сих пор остаётся одним из наиболее популярных и востребованных объектов в которых осуществляется наработка нужных белков. Во многом это связано с удобством работы с этой бактерией, низкими затратами для её культивирования, а также малыми сроками для получения биомассы. Для того, чтобы Е.coli вырабатывала нужный белок, в нее помещают специально сконструированную методами генной инженерии кольцевую молекулу ДНК (плазмиду), содержащую ген данного белка.
В рамках проекты мы сконструируем и протестируем новую плазмиду для получения терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазы (TdT) в клетках бактерий, а также проверим успешно ли происходит в них его синтез. Интересующий нас в данном проекте фермент TdT может присоединять нуклеотиды на 3` конец молекулы ДНК. В отличие от традиционно используемых в биотехнологии ДНК полимераз, осуществляющих основной синтез ДНК в клетках и in vitro, TdT не нуждается в матрице, которую она «копирует». Благодаря этому, этот фермент сейчас начинают использовать для синтеза искусственных фрагментов ДНК с заданной последовательностью in vitro. Эта технология может стать основой синтезаторов ДНК нового поколения
Приняв участие в данном проекте Вы научитесь:
- Строить и анализировать карты плазмид
- Получать плазмиды методами рестрикции и лигирования
- Выделять ДНК из агарозного геля и клеток бактерий
- Работать с бактериями (культивирование, трансформация)
- Проводить выделение и разделение белков с помощью электрофореза в полиакриламидном геле
- Пройдете весь путь от идеи до получения рекомбинантного белка в E.coli.
